公卫执业医师考点：炭疽诊断标准及处理原则—附录B

　　炭疽血清学检查

　　B1 标本的采取

在不具备细菌学检验条件时，或者发现可疑的炭疽病人时，病人已经接受了抗生素治疗的条件下，可依据血清学检验结果确定对病人的.追溯诊断。由于诊断必须由双份血清做出，需要特别强调急性期血清的采取。

首份血清应在首次检视病人时采取，通常应一次采取血液标本供涂片镜检，细菌分离培养，血清学检查及常规的血液检查使用。血清分离后置4℃保存，待获得恢复期血清后，一同进行抗体检查。

恢复期血清应在发病后15日左右采取。

　　B2 酶联免疫吸附试验(ELISA)

采用酶联免疫吸附试验来检测病人血液内针对炭疽芽孢杆菌保护性抗原的抗体，试验方法如下。

B2.1 滴定板包被

炭疽芽孢杆菌的保护性抗原以0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)稀释至30～50mg/mL，加至滴定板孔中，每孔0.1mL，4℃ 18h.次日倾去抗原液，用0.5mol/L盐水洗板2次。

B2.2 待检血清

待检血清以含0.05%牛血清白蛋白的0.01mol/L PBS(pH7.2)倍比稀释，每孔0.1mL，置37℃1h，倾去血清，以0.5mol/L盐水洗板3次。

B2.3 耦联酶标记

使用辣根过氧化物酶标记的羊(兔)抗人IgG，或该酶标记的葡萄球菌A蛋白检验已与上述抗原结合的IgG抗体。每孔加0.1mL，37℃温育40min，倾去标记液，以0.5mol/L盐水洗板5次。

B2.4 显色

每孔中加入0.1mL底物液，底物液应在临用时按以下配方配制：

0.1mol/L柠檬酸 2.43mL

0.2mol/L磷酸氢二钠 2.57mL

邻苯二胺 4mg

蒸馏水 5mL

30%过氧化氢 15mL

37℃ 20min后，每孔加2mol/L硫酸1滴终止反应。

B2.5 结果判断

实验结果可用酶标仪判读，被检孔OD值达阴性血清对照孔OD值的2.1倍时，始可判为阳性。在没有酶标仪的情况下，也可用目测判读，被检孔显示与阴性对照孔具有明显区别的黄褐色时，始判为阳性。