公衛執業醫師考點：炭疽診斷標準及處理原則—附錄B

　　炭疽血清學檢查

　　B1 標本的採取

在不具備細菌學檢驗條件時，或者發現可疑的炭疽病人時，病人已經接受了抗生素治療的條件下，可依據血清學檢驗結果確定對病人的.追溯診斷。由於診斷必須由雙份血清做出，需要特別強調急性期血清的採取。

首份血清應在首次檢視病人時採取，通常應一次採取血液標本供塗片鏡檢，細菌分離培養，血清學檢查及常規的血液檢查使用。血清分離後置4℃儲存，待獲得恢復期血清後，一同進行抗體檢查。

恢復期血清應在發病後15日左右採取。

　　B2 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)

採用酶聯免疫吸附試驗來檢測病人血液內針對炭疽芽孢桿菌保護性抗原的抗體，試驗方法如下。

B2.1 滴定板包被

炭疽芽孢桿菌的保護性抗原以0.05mol/L碳酸鹽緩衝液(pH9.6)稀釋至30～50mg/mL，加至滴定板孔中，每孔0.1mL，4℃ 18h.次日傾去抗原液，用0.5mol/L鹽水洗板2次。

B2.2 待檢血清

待檢血清以含0.05%牛血清白蛋白的0.01mol/L PBS(pH7.2)倍比稀釋，每孔0.1mL，置37℃1h，傾去血清，以0.5mol/L鹽水洗板3次。

B2.3 耦聯酶標記

使用辣根過氧化物酶標記的羊(兔)抗人IgG，或該酶標記的葡萄球菌A蛋白檢驗已與上述抗原結合的IgG抗體。每孔加0.1mL，37℃溫育40min，傾去標記液，以0.5mol/L鹽水洗板5次。

B2.4 顯色

每孔中加入0.1mL底物液，底物液應在臨用時按以下配方配製：

0.1mol/L檸檬酸 2.43mL

0.2mol/L磷酸氫二鈉 2.57mL

鄰苯二胺 4mg

蒸餾水 5mL

30%過氧化氫 15mL

37℃ 20min後，每孔加2mol/L硫酸1滴終止反應。

B2.5 結果判斷

實驗結果可用酶標儀判讀，被檢孔OD值達陰性血清對照孔OD值的2.1倍時，始可判為陽性。在沒有酶標儀的情況下，也可用目測判讀，被檢孔顯示與陰性對照孔具有明顯區別的黃褐色時，始判為陽性。